Validación del método de detección de antígeno prostático específico (psa), por inmunocromatografía (Orgenics) aplicado a líquido seminal presente en manchas secas y escobillones
| Autor | Sandra Liliana Cifuentes |
| Cargo | Bacterióloga Instituto Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses |
| Páginas | 24-28 |
Colombia forense 24
INMLCF 25
INVESTIGACIONES ORIGINALES
Validación del método de detección de antígeno
prostático específico (PSA), por inmunocromatografía
(Orgenics) aplicado a líquido seminal presente en
manchas secas y escobillones
Autores
Sandra Liliana Cifuentes
Bacterióloga
Instituto Nacional de Medicina Legal
y Ciencias Forenses
Pedro Vargas Pinilla
Biólogo
Pontificia Universidad Javeriana
Autor responsable de la correspondencia
Sandra Liliana Cifuentes
Calle 7ª No. 12 – 61
Instituto Nacional de Medicina Legal
y Ciencias Forenses
Laboratorio de Biología Forense
Tel. 3203474
osorio_sandra@yahoo.es
Bogotá, Colombia
Título abreviado
Validación PSA por
inmunocromatografía en semen
Agradecemos al Instituto Nacional de Medicina
Legal y Ciencias Forenses en especial sus
peritos forenses y estudiantes de la Regional
Bogotá, por el aporte teórico, técnico y/o
humano que nos brindaron para la realización
de este estudio. Al Doctor Eleftherios
Diamandis por la información aportada, a la
empresa Orgenics y demás personas que de
una u otra forma contribuyeron a la finalización
de este estudio.
ABSTRACT
The Prostate Specific Antigen (PSA)
generally is used quantitatively to detect
and to watch over the development of
prostate of cancer by serum levels of
this protein, but also is found in high
concentrations in semen. Different sensitive,
reproducible and simple methods have been
developed for the analysis of the presence
of PSA including inmunocromatografy
techniques. The procedures most common
in the forensic detection of semen have
focused in the detection of spermatozoa,
inmunoelectroforetic activity of acid
phosphatase and methods for the PSA
detection. Although these methods has been
used by many years, but some problems are
associated with each method. The objective
of this investigation was to validate the
inmunocromatografy test in the detection
of PSA in forensic evidences. Different
dilutions of semen standar (100.000 ng/ml of
PSA) were made, determining the low limit
detection in 10 ng/ml. Positive results were
obtained since concentrations of 500ng/ml
in stains and swabs. The performance of
the test was evaluated in the presence of
interferences, such as blood, male and female
urine, maternal milk, vaginal secretions,
feces and saliva. It shows positive results
in samples of blood and male urine with
prostatic cancer. We reported a sensitivity
of 91.6 % and a specificity of 100 %. These
results suggest that this presumtive test can
be usefull as preliminar test to determinate
presence of semen in forensic samples.
Key words: Forensic evidences;
Immunocromatografy; Prostate Specific
Antigen (PSA); semen.
Validation of detection
method prostatic
specific antigen (PSA) by
inmunocromatrografyc
(Orgenics) applied to
seminal liquid in stain dry
and swabs
RESUMEN
El antígeno prostático específico (PSA)
es generalmente usado para detectar y
monitorear cuantitativamente el desarrollo
de cáncer de próstata por niveles en suero
de esta proteína, esta también es encontrada
en altas concentraciones en semen. Diversos
métodos reproducibles, sensibles y simples
han sido desarrollados para el análisis de
la presencia de PSA incluyendo técnicas
inmunocromatográficas. Los procedimientos
más comunes para la detección forense de
semen se han enfocado en la identificación
de espermatozoides, actividad de la fosfatasa
ácida y métodos inmunoelectroforéticos.
Aunque estos métodos han sido utilizados
por muchos años, existen algunos problemas
asociados con cada método. El objetivo
de esta investigación fue validar la prueba
inmunocromatográfica para la detección
de PSA en muestras forenses, para ello se
realizaron diferentes diluciones de un patrón
de semen con una concentración de PSA de
100.000ng/ml, encontrándose un límite de
detección de 10 ng/ml. En manchas secas
y escobillones, se presentaron resultados
positivos a partir de concentraciones de
500 ng/ml. De igual manera se evaluó
el comportamiento de la prueba ante
interferentes, tales como sangre, orina
masculina y femenina, leche materna,
secreciones vaginales, materia fecal y
saliva. Mostrando resultados positivos para
sangre y orina de un individuo con cáncer de
próstata se reporta una sensibilidad de 91.6%
y una especificidad de 100%. Los resultados
sugieren que este test puede ser usado como
presuntivo para determinar la presencia de
semen en muestras forenses.
Palabras Clave: antígeno prostático
específico (PSA), evidencias forenses,
immunocromatografia, semen.
INTRODUCCIÓN
El incremento de las denuncias de
violaciones sexuales en Colombia en los
últimos años, obliga a los laboratorios de
biología forense a satisfacer la demanda
de análisis a través de procedimientos
rápidos, eficaces, sensibles y específicos,
por ello es necesario determinar sí la
prueba de detección de PSA (Antígeno
Prostático Específico) es un test que
permite detectar la presencia de semen
en evidencias forenses.
El PSA es una serin-proteasa con
funciones similares a la quimiotripsina,
fue descrita en 1971 por Hara y
colaboradores (1971), fue denominada
en un principio como g-seminoproteina
o P30, llamada de esta manera por
su peso aproximado de 30 Kdaltons,
inicialmente se pensó que podía ser
una proteína especifica de próstata no
obstante posteriormente se registro en
diferentes fluidos y tejidos, tales como en
suero y orina de hombres con patologías
prostáticas (Yokota M et al., 2001),
fluido amniótico (Yu & Diamandis,
1995) leche mater na (Yu & Diamandis,
1995b) y saliva (Simich JP, 1999).
El PSA se puede detectar de dos
formas: unido al inhibidor alfa-1-
antiquimotrípsina (PSA ACT) o de
forma libre aparentemente inactiva.
En condiciones normales muy poca
cantidad es derivada hacia la circulación,
se pueden considerar valores superiores
a 4 ng/ml como anormales.(Irani J,
1997)
La inmunocromatografia es una técnica
que cuenta con una región de prueba
la cual esta cubierta con una anti-PSA-
anticuerpo monoclonal y la región
control con un anticuerpo policlonal
antiimmunoglobulina, como se ilustra
en la figura 1. Una capa sobre la
membrana contiene un segundo anti-
PSA-anticuerpo monoclonal marcado
con determinado colorante. El PSA en la
muestra reacciona con el segundo anti-
PSA-anticuerpo formando un complejo
marcado, el cual es desplazado por el
efecto de capilaridad de las membrana,
en cualquier caso el complejo se une al
anticuerpo de inmunoglobulina en la
región control y en caso de ser positivo el
complejo anti-PSA-anticuerpo se une al
anti-PSA-anticuerpo, visualizando una
línea roja en la región de prueba(Yokota
M et al., 2001). El estándar interno de la
membrana es cubierto con un anticuerpo
policlonal de inmunoglobulina ajustado
para visualizar la línea roja con
una intensidad correspondiente a la
intensidad del test con una concentración
de PSA de 3ng/ml. De esta forma los
casos positivos se evidencian por la
presencia de una banda coloreada en
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